Real-Time PCR
La PCR en tiempo real es una técnica de diagnóstico molecular utilizada para detectar y amplificar ácidos nucleicos de patógenos durante el propio proceso de amplificación. A diferencia de la PCR convencional, la PCR en tiempo real permite monitorizar la amplificación de forma continua mediante señales fluorescentes, lo que facilita una detección más rápida y precisa.
Esta técnica se utiliza ampliamente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas porque ofrece una elevada sensibilidad y especificidad analítica, al tiempo que reduce de forma significativa el tiempo de respuesta en comparación con los métodos tradicionales basados en cultivo.
La PCR en tiempo real puede detectar dianas virales, bacterianas, fúngicas y parasitarias directamente a partir de muestras clínicas, incluso cuando están presentes en bajas concentraciones.
Además, esta tecnología permite realizar ensayos multiplex, facilitando la detección simultánea de varios patógenos en una única reacción.
La PCR con retrotranscriptasa (conocida como RT-PCR), es una variante de la PCR utilizada para detectar dianas de ARN. Dado que la amplificación por PCR requiere ADN, el ARN viral o celular debe convertirse primero en ADN complementario, o cDNA, mediante una etapa de transcripción inversa antes de la amplificación.
La RT-PCR se utiliza habitualmente para la detección de virus ARN, como influenza, VRS, SARS-CoV-2 y otros patógenos respiratorios. Esta técnica combina una alta sensibilidad con tiempos de respuesta rápidos, por lo que es una de las herramientas más importantes en el diagnóstico molecular de enfermedades infecciosas.
En los flujos de trabajo rutinarios de laboratorio, los ensayos de RT-PCR suelen integrarse en paneles sindrómicos multiplex para la detección simultánea de varios patógenos respiratorios o gastrointestinales.
El valor Ct, o ciclo umbral, representa el número de ciclos de amplificación necesarios para que la señal fluorescente supere el umbral de detección durante una PCR.
Los valores Ct bajos suelen asociarse con concentraciones más elevadas de ácido nucleico diana, mientras que los valores Ct altos pueden indicar una menor carga del patógeno o una detección a bajo nivel.
Los valores Ct deben interpretarse siempre dentro del contexto clínico y de acuerdo con las recomendaciones específicas de cada ensayo.
Los valores Ct pueden verse influidos por varios factores, entre ellos:
- Calidad de la muestra
- Eficiencia de la extracción
- Diseño del ensayo
- Rendimiento del instrumento
- Momento de recogida de la muestra
Dado que los valores Ct dependen del método utilizado, no siempre es adecuado compararlos directamente entre diferentes ensayos o instrumentos.
La PCR multiplex es una técnica molecular que permite detectar varias dianas genéticas de forma simultánea en una única reacción.
Al combinar varios conjuntos de cebadores y sondas en un mismo ensayo, la PCR multiplex ayuda a los laboratorios a mejorar la eficiencia del flujo de trabajo, reducir el consumo de reactivos y acortar el tiempo de respuesta.
Este enfoque es especialmente útil en el diagnóstico sindrómico, donde diferentes patógenos pueden causar síntomas clínicos similares.
Algunos ejemplos son:
- Paneles de patógenos respiratorios
- Paneles de patógenos gastrointestinales
- Paneles de infecciones de transmisión sexual
La PCR multiplex también ayuda a optimizar el uso de la muestra, especialmente cuando el volumen disponible es limitado.
La PCR cualitativa determina si una diana de ácido nucleico se detecta o no en una muestra. El resultado suele informarse como positivo, negativo o inválido.
La PCR cuantitativa, también conocida como qPCR, mide la cantidad de ácido nucleico diana presente en la muestra. Los resultados suelen expresarse como copias/mL, UI/mL u otra unidad cuantitativa estandarizada.
Los ensayos cualitativos se utilizan habitualmente para la detección rutinaria de patógenos, mientras que los ensayos cuantitativos se emplean con frecuencia para:
- Monitorización de carga viral
- Seguimiento del tratamiento
- Evaluación de la progresión de la enfermedad
- Evaluación de la respuesta terapéutica
Los tipos de muestra compatibles dependen del ensayo y del patógeno diana. Entre las muestras clínicas utilizadas habitualmente en diagnóstico molecular se incluyen:
- Hisopos nasofaríngeos
- Hisopos orofaríngeos
- Esputo
- Lavado broncoalveolar
- Suero
- Plasma
- Sangre total
- Heces
- Orina
- Hisopos genitales
Una recogida y transporte adecuados de la muestra son esenciales para preservar la integridad de los ácidos nucleicos y garantizar resultados fiables.
Los laboratorios deben seguir siempre las instrucciones de uso del ensayo en relación con los tipos de muestra validados y las condiciones de transporte.
Los reactivos de PCR y los controles moleculares deben almacenarse según las condiciones especificadas en las instrucciones de uso para preservar la estabilidad y el rendimiento del ensayo.
Las recomendaciones generales pueden incluir:
- Almacenar los reactivos congelados o refrigerados según se indique en las instrucciones de uso
- Minimizar los ciclos de congelación y descongelación
- Proteger los reactivos fluorescentes de la exposición prolongada a la luz
- Evitar fluctuaciones repetidas de temperatura
- Monitorizar de forma rutinaria la temperatura de congeladores y refrigeradores
Un almacenamiento inadecuado de los reactivos puede afectar a la eficiencia de amplificación, la consistencia de los valores Ct y la fiabilidad global del ensayo.
La conservación adecuada de las muestras es fundamental para mantener la estabilidad de los ácidos nucleicos y garantizar resultados moleculares precisos.
Siempre que sea posible, las muestras deben procesarse poco después de su recogida. Si no es posible realizar el análisis de forma inmediata, las muestras deben conservarse de acuerdo con las recomendaciones del ensayo y el tipo de muestra recogida.
Deben minimizarse los ciclos repetidos de congelación y descongelación, ya que pueden degradar los ácidos nucleicos y afectar al rendimiento del ensayo.
Las condiciones de transporte, la temperatura de almacenamiento y el medio de transporte pueden influir en la calidad del resultado de PCR.
La inhibición de la PCR se produce cuando determinadas sustancias presentes en la muestra clínica interfieren con la extracción o amplificación de ácidos nucleicos.
Entre los inhibidores más habituales se incluyen:
- Moco
- Componentes sanguíneos
- Hemoglobina
- Heparina
- Determinados medios de transporte
- Exceso de material celular
Las muestras inhibidas pueden generar resultados falsos negativos o inválidos. Los controles internos son esenciales para identificar episodios de inhibición y garantizar la fiabilidad del resultado.
Una preparación adecuada de la muestra y procedimientos de extracción validados ayudan a minimizar el riesgo de inhibición.
Un control interno es un material no diana incluido en el flujo de trabajo de PCR para monitorizar el rendimiento del ensayo e identificar posibles fallos de extracción o amplificación.
Los controles internos ayudan a los laboratorios a detectar:
- Inhibición de la PCR
- Fallo de extracción
- Problemas con los reactivos
- Errores en el flujo de trabajo
Dependiendo del diseño del ensayo, los controles internos pueden añadirse durante la extracción o directamente en la reacción de amplificación.
El uso de controles internos se considera esencial en diagnóstico molecular para garantizar la validez de los resultados y mejorar la fiabilidad del flujo de trabajo.
La prevención de la contaminación es uno de los aspectos más críticos en los flujos de trabajo de diagnóstico molecular.
Entre las medidas recomendadas se incluyen:
- Organización del flujo de trabajo en una sola dirección.
- Separación física de las áreas de preamplificación y postamplificación.
- Uso de equipos y consumibles dedicados.
- Limpieza ambiental rutinaria.
- Uso adecuado de equipos de protección individual.
- Monitorización periódica de la contaminación.
- Inclusión de controles negativos en cada serie.
La contaminación por amplicones puede generar resultados falsos positivos y comprometer la fiabilidad del laboratorio. Los procedimientos estrictos de control de contaminación son esenciales para mantener la integridad del ensayo.
Antes de su implementación en la rutina, los laboratorios deben verificar el rendimiento del ensayo de acuerdo con su sistema de gestión de calidad y los requisitos de acreditación aplicables.
Los estudios de verificación suelen incluir la evaluación de:
- Precisión
- Reproducibilidad
- Sensibilidad analítica
- Especificidad analítica
- Exactitud
- Límite de detección
- Arrastre o carryover
- Comparación con un método de referencia
El alcance de la verificación depende de:
- Complejidad del ensayo
- Uso previsto
- Flujo de trabajo del laboratorio
- Estado regulatorio
Todos los estudios deben documentarse y revisarse conforme a los procedimientos de acreditación del laboratorio.
Los controles moleculares externos son materiales estandarizados utilizados para monitorizar el rendimiento del ensayo de forma independiente a los controles integrados en el kit. Ayudan a los laboratorios a verificar que el flujo de trabajo molecular funciona correctamente y de manera consistente a lo largo del tiempo.
Los controles AmpliRun® de Vircell pueden utilizarse como controles externos de amplificación para monitorizar el rendimiento de los ensayos de PCR, la consistencia de los valores Ct y la variabilidad entre series. Los controles AmpliRun® Total están diseñados para apoyar la monitorización del flujo de trabajo molecular completo, incluyendo las etapas de extracción y amplificación, lo que los hace útiles para identificar fallos que pueden producirse antes de la propia reacción de PCR.
Para más información, consulte nuestra web de AmpliRun®.
Los controles externos ayudan a los laboratorios a:
- Verificar la consistencia del ensayo.
- Monitorizar la variabilidad de Ct.
- Detectar desviaciones en el flujo de trabajo.
- Apoyar la verificación del ensayo.
- Evaluar el rendimiento de la extracción y la amplificación.
- Mantener la garantía de calidad a largo plazo.
Son especialmente valiosos para laboratorios que trabajan bajo la norma ISO 15189 o estándares de calidad similares, donde las estrategias de control documentadas, la monitorización de tendencias y la verificación del rendimiento son esenciales.
Los valores Ct tardíos pueden producirse por distintos motivos, entre ellos:
- Baja concentración de la diana
- Mala calidad de la muestra
- Ácidos nucleicos degradados
- Extracción ineficiente
- Inhibición parcial
- Momento inadecuado de recogida de la muestra
La amplificación tardía debe interpretarse siempre con cautela dentro del contexto clínico y técnico.
Los laboratorios deben revisar:
- Rendimiento del control interno
- Integridad de la muestra
- Rendimiento del instrumento
- Flujo de trabajo de extracción
- Criterios de interpretación específicos del ensayo
Los resultados inválidos suelen indicar que los controles de calidad del ensayo o los controles internos no han funcionado como se esperaba.
Entre las posibles causas se incluyen:
- Inhibición de la PCR
- Fallo de extracción
- Degradación de reactivos
- Problemas del instrumento
- Errores en el flujo de trabajo
- Manipulación incorrecta de la muestra
Cuando se obtienen resultados inválidos, los laboratorios deben repetir el análisis de acuerdo con sus procedimientos internos y revisar todos los parámetros de control de calidad antes de liberar el resultado.
La documentación disponible puede incluir:
- Instrucciones de uso
- Resúmenes de evaluación del rendimiento
- Datos de sensibilidad analítica
- Estudios de especificidad
- Estudios de precisión
- Materiales de apoyo a la verificación
Los laboratorios deben evaluar el rendimiento del ensayo de acuerdo con su sistema interno de gestión de calidad y los estándares de acreditación aplicables.
Los controles moleculares externos como AmpliRun® y AmpliRun® Total pueden apoyar los flujos de trabajo moleculares acreditados ayudando a los laboratorios a monitorizar la consistencia del ensayo, el rendimiento de la extracción y la garantía de calidad a largo plazo, de acuerdo con las prácticas de gestión de calidad de la norma ISO 15189.
ELISA
ELISA, o ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas, es una técnica inmunológica utilizada para detectar anticuerpos o antígenos en muestras clínicas mediante interacciones específicas antígeno-anticuerpo.
El método combina reacciones enzimáticas con detección colorimétrica para generar señales medibles proporcionales a la presencia del analito diana.
Los ensayos ELISA se utilizan ampliamente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas porque ofrecen:
• alta fiabilidad analítica
• escalabilidad
• compatibilidad con flujos de trabajo automatizados
• análisis rutinarios coste-efectivos
Las pruebas ELISA se utilizan habitualmente para:
• cribado serológico
• evaluación del estado inmunitario de un paciente
• diagnóstico de enfermedades infecciosas
• estudios epidemiológicos
Los anticuerpos IgM se asocian generalmente con la respuesta inmunitaria temprana tras la exposición inicial a un agente infeccioso, mientras que los anticuerpos IgG suelen aparecer más tarde y pueden persistir a largo plazo tras una infección o vacunación.
En muchas enfermedades infecciosas:
• la detección de IgM puede sugerir una infección reciente o aguda
• la detección de IgG puede indicar exposición previa o memoria inmunológica
No obstante, la interpretación depende del patógeno específico, la historia clínica del paciente, el momento de obtención de la muestra, el estado de vacunación y la situación inmunitaria del paciente.
Los resultados serológicos deben interpretarse siempre junto con los hallazgos clínicos y, cuando sea necesario, con información adicional de laboratorio.
Los tipos de muestra compatibles dependen del ensayo específico y del analito diana. Las muestras utilizadas habitualmente en las pruebas ELISA incluyen suero y plasma.
La correcta obtención, transporte y conservación de las muestras es esencial para garantizar resultados serológicos precisos.
Los laboratorios deben seguir siempre las Instrucciones de uso del ensayo en relación con:
- tipos de muestra validados
- compatibilidad con anticoagulantes
- condiciones de conservación
- recomendaciones sobre estabilidad de la muestra
La correcta conservación de las muestras es importante para preservar la estabilidad de anticuerpos y antígenos, y garantizar un rendimiento fiable del ensayo.
Las recomendaciones generales incluyen:
- refrigeración a 2–8 °C para conservación a corto plazo
- congelación para conservación a largo plazo
- minimizar los ciclos repetidos de congelación-descongelación
- evitar la exposición prolongada a temperatura ambiente
Unas condiciones de conservación inadecuadas pueden afectar a la integridad de la muestra y contribuir a resultados inexactos o inconsistentes.
Los laboratorios deben seguir siempre las Instrucciones de uso específicas del ensayo y los procedimientos internos del laboratorio.
Sí. Muchos kits ELISA de Vircell son compatibles con procesadores ELISA abiertos y sistemas de automatización de laboratorio.
La automatización puede ayudar a los laboratorios a aumentar el rendimiento, reducir el tiempo de manipulación manual, mejorar la reproducibilidad, estandarizar el flujo de trabajo y disminuir la variabilidad asociada al pipeteo manual.
La compatibilidad depende de la configuración del analizador y de los requisitos del ensayo. Los laboratorios deben verificar y validar previamente la compatibilidad con la automatización de acuerdo con su flujo de trabajo e instrumentación.
Unas condiciones de agitación adecuadas son importantes para garantizar una distribución homogénea de los reactivos y un rendimiento óptimo del ensayo durante las etapas de incubación.
Los laboratorios deben utilizar agitadores orbitales de microplacas validados para aplicaciones ELISA y seguir las condiciones especificadas en las Instrucciones de uso del ensayo.
Una agitación excesiva puede aumentar la señal de fondo o provocar salpicaduras entre pocillos, mientras que una agitación insuficiente puede afectar a la consistencia de la reacción y a la reproducibilidad del ensayo.
Unas condiciones de incubación constantes ayudan a mejorar la precisión y a reducir la variabilidad entre series. Se recomienda programar una velocidad suficientemente alta para asegurar la mezcla de los componentes sin derramar el contenido de los pocillos (después de la agitación no deben quedar restos de líquido en el papel adhesivo que cubre la placa).
Los resultados ELISA dudosos o equívocos deben interpretarse cuidadosamente dentro del contexto clínico y de laboratorio.
Los resultados dudosos pueden producirse debido a:
- concentraciones bajas de anticuerpos
- seroconversión temprana
- reactividad inespecífica
- variabilidad de la muestra
- anticuerpos con reacción cruzada
En función de la situación clínica, los laboratorios o clínicos pueden considerar:
- repetir la prueba
- obtener una muestra de seguimiento
- utilizar métodos diagnósticos complementarios
- correlacionar con la información clínica
La interpretación debe seguir siempre las recomendaciones específicas del ensayo y los procedimientos del laboratorio.
Los resultados serológicos falsos positivos pueden producirse cuando los anticuerpos reaccionan de forma inespecífica con componentes del ensayo o con antígenos con reacción cruzada.
Entre las posibles causas se incluyen anticuerpos con reacción cruzada, enfermedades autoinmunes, anticuerpos heterófilos, infecciones recientes, activación inmunitaria inespecífica y desviaciones técnicas en el flujo de trabajo.
Los procedimientos adecuados de control de calidad, la validación del ensayo y la correlación clínica son esenciales para una interpretación precisa de los resultados serológicos.
Los laboratorios deben verificar el rendimiento del ensayo de acuerdo con su sistema de gestión de calidad y los requisitos de acreditación.
Los estudios de verificación pueden incluir la evaluación de la precisión, la valoración de la reproducibilidad, estudios comparativos, revisión del rendimiento analítico, verificación del flujo de trabajo y evaluación del control de calidad.
El alcance de la verificación depende de:
- el uso previsto
- la complejidad del ensayo
- el flujo de trabajo del laboratorio
- los requisitos de acreditación
Todas las actividades de verificación deben documentarse de acuerdo con los procedimientos del laboratorio.
Los controles de calidad ayudan a los laboratorios a monitorizar la consistencia del ensayo y a verificar el correcto rendimiento de la prueba.
Los procedimientos rutinarios de control de calidad incluyen controles positivos, controles negativos, controles de punto de corte y materiales internos de calidad del laboratorio.
La monitorización del control de calidad ayuda a:
- detectar desviaciones en el flujo de trabajo
- identificar inestabilidad de los reactivos
- mejorar la fiabilidad de los resultados
- respaldar el cumplimiento de los requisitos de acreditación
Los laboratorios deben seguir las Instrucciones de uso del ensayo y los procedimientos internos de gestión de calidad para la implementación y documentación del control de calidad.
Una señal de fondo elevada puede producirse cuando reacciones inespecíficas o un lavado inadecuado interfieren con el rendimiento del ensayo.
Las causas frecuentes incluyen:
- lavado insuficiente
- preparación incorrecta de los reactivos
- desviaciones en la incubación
- contaminación
- concentración excesiva de conjugado
- condiciones de bloqueo inadecuadas
Un fondo elevado puede reducir la especificidad del ensayo y dificultar la interpretación de los resultados.
El mantenimiento rutinario de los lavadores, una organización adecuada del flujo de trabajo y el cumplimiento de los procedimientos del ensayo ayudan a minimizar los problemas de fondo.
Una baja reproducibilidad entre pocillos duplicados puede deberse a inconsistencias durante la preparación de la muestra o la manipulación del ensayo.
Las posibles causas incluyen:
• variabilidad en el pipeteo
• lavado inadecuado
• condiciones de incubación no uniformes
• manipulación incorrecta de la placa
• inestabilidad de los reactivos
• mezcla insuficiente
Una técnica de laboratorio constante, equipos calibrados y procedimientos de trabajo estandarizados son esenciales para mejorar la reproducibilidad del ensayo.
Los reactivos ELISA deben conservarse de acuerdo con las condiciones especificadas en las Instrucciones de uso para preservar la estabilidad del ensayo y su rendimiento analítico.
Las recomendaciones generales pueden incluir:
• mantener las condiciones de refrigeración recomendadas
• minimizar la exposición prolongada a temperatura ambiente
• proteger los reactivos sensibles a la luz
• monitorizar de forma rutinaria las temperaturas de conservación
Unas condiciones de conservación inadecuadas pueden afectar a la actividad enzimática, la generación de señal y la fiabilidad global del ensayo.
La optimización del flujo de trabajo puede mejorarse mediante:
• organización sistemática de la preparación de muestras
• estandarización de los tiempos de incubación
• validación de los procedimientos de lavado
• monitorización de la estabilidad de los reactivos
• implementación de una revisión rutinaria del control de calidad
• formación periódica del personal de laboratorio
Una correcta organización del flujo de trabajo ayuda a mejorar la reproducibilidad, reducir errores y mantener un rendimiento constante del ensayo en el diagnóstico rutinario.
VirClia Monotest
El inmunoensayo quimioluminiscente (CLIA) es una técnica de detección inmunológica que utiliza reacciones químicas emisoras de luz para identificar interacciones antígeno-anticuerpo.
La tecnología CLIA combina una alta sensibilidad analítica con capacidades de flujo de trabajo automatizado, por lo que se utiliza ampliamente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas y en laboratorios clínicos de rutina.
En comparación con los inmunoensayos colorimétricos convencionales, la quimioluminiscencia puede proporcionar:
- mayor sensibilidad analítica
- rango dinámico más amplio
- mejor automatización
- menor tiempo de respuesta
La tecnología monotest es un formato de ensayo en el que cada determinación está envasada individualmente y se procesa de forma independiente, en lugar de realizarse en grandes lotes.
Este enfoque permite a los laboratorios procesar únicamente el número de pruebas necesario, lo que ayuda a reducir el desperdicio de reactivos y a mejorar la flexibilidad del flujo de trabajo.
Los sistemas monotest son especialmente útiles para laboratorios que procesan:
- bajos volúmenes diarios de muestras
- muestras urgentes
- cargas de trabajo variables
- múltiples parámetros simultáneamente
Un kit VirClia contiene 24 pruebas de un solo uso. Cada tira está compuesta por 3 pocillos de reacción y 5 pocillos de reactivos, que se utilizan durante el ensayo.
Adicionalmente, algunas referencias VirClia están disponibles en formato placa, que consiste en 48 pruebas empaquetadas en placas individuales, cada una de ellas compuesta por 12 tiras. Este formato permite mejorar el flujo de procesamiento en referencias con mayor volumen de muestras.
La caducidad de los kits de VirClia® es de 15 meses desde la fecha de fabricación siempre y cuando se respeten las condiciones de conservación (2 y 8ºC).
Los sistemas VirClia combinan la sensibilidad de la quimioluminiscencia con la flexibilidad operativa de la tecnología monotest.
Estos sistemas están diseñados para favorecer:
- pruebas de acceso aleatorio
- reducción del desperdicio de reactivos
- simplificación del flujo de trabajo
- menor tiempo de respuesta
- gestión flexible de parámetros
- bajo tiempo de intervención manual
Los analizadores VirClia son especialmente valiosos en laboratorios que requieren pruebas eficientes para enfermedades infecciosas sin las limitaciones asociadas a los analizadores tradicionales por lotes.
Las pruebas de acceso aleatorio permiten procesar muestras y parámetros de forma independiente, sin necesidad de esperar a completar un lote analítico completo.
Este flujo de trabajo mejora la flexibilidad del laboratorio al permitir:
- priorización de muestras urgentes
- carga continua
- análisis simultáneo de parámetros
- mejora del tiempo de respuesta
Los sistemas de acceso aleatorio son especialmente beneficiosos para laboratorios que gestionan volúmenes de muestras impredecibles o solicitudes con requisitos de tiempo críticos.
Sí. Los analizadores VirClia permiten el funcionamiento con acceso aleatorio, lo que permite introducir y procesar muestras urgentes de forma inmediata sin interrumpir el flujo de trabajo rutinario.
Esta capacidad ayuda a los laboratorios a mejorar los tiempos de respuesta para muestras prioritarias y a optimizar la gestión diaria del flujo de trabajo.
Los sistemas monotest VirClia están diseñados para simplificar la operación del flujo de trabajo y minimizar la complejidad de la calibración rutinaria en comparación con algunas metodologías tradicionales por lotes.
Los procedimientos específicos de calibración y control de calidad dependen del ensayo y de la configuración del analizador, y siempre deben seguir las Instrucciones de uso correspondientes.
Los reactivos VirClia deben almacenarse de acuerdo con las condiciones especificadas en las Instrucciones de uso para preservar su estabilidad y rendimiento analítico.
Las recomendaciones generales incluyen:
- mantener las condiciones de refrigeración recomendadas
- evitar fluctuaciones de temperatura
- proteger los reactivos frente a la contaminación
- controlar rutinariamente las temperaturas de almacenamiento
Unas condiciones de almacenamiento inadecuadas pueden afectar a la estabilidad de la señal y a la fiabilidad del ensayo.
Los analizadores VirClia están diseñados para admitir la integración con sistemas de información de laboratorio, como LIS/SIL, con el fin de facilitar la trazabilidad de las muestras, la gestión de resultados y la estandarización del flujo de trabajo mediante un middleware.
Las capacidades de conectividad pueden depender del software LIS/SIL y de la infraestructura local del laboratorio.
Sí. Los sistemas VirClia están diseñados para permitir la gestión simultánea de diferentes parámetros de enfermedades infecciosas dentro del mismo flujo de trabajo.
Esta flexibilidad puede ayudar a los laboratorios a optimizar la operación rutinaria y mejorar la eficiencia del flujo de trabajo.
Cuando los controles de calidad se encuentran fuera del rango esperado, los laboratorios deben investigar las posibles causas antes de liberar resultados de pacientes.
Las posibles causas incluyen:
- degradación de los reactivos
- condiciones de almacenamiento incorrectas
- problemas de mantenimiento del analizador
- desviaciones de calibración
Las acciones correctivas deben llevarse a cabo por personal autorizado y correctamente formado para la manipulación de los analizadores a un nivel técnico.
Los ensayos VirClia están destinados al uso diagnóstico clínico. Se desarrollan y fabrican de acuerdo con los requisitos regulatorios europeos aplicables a los productos sanitarios para diagnóstico in vitro.
El estado regulatorio del producto y su uso previsto se especifican en las Instrucciones de uso y en la documentación del producto correspondientes.
El mantenimiento rutinario es esencial para garantizar un rendimiento óptimo del analizador y la fiabilidad del flujo de trabajo a largo plazo.
Las recomendaciones generales incluyen:
- procedimientos de limpieza diaria
- verificación periódica del mantenimiento
- gestión adecuada de residuos
- monitorización del estado de los consumibles
- seguimiento de los programas de mantenimiento preventivo
Los laboratorios deben seguir siempre los procedimientos de mantenimiento específicos del analizador descritos en la documentación técnica correspondiente.
La optimización del flujo de trabajo puede mejorarse mediante:
- organización de la gestión de muestras rutinarias y urgentes
- monitorización del uso de reactivos
- implementación de revisiones periódicas del control de calidad
- mantenimiento de programas de mantenimiento preventivo
- formación adecuada del personal del laboratorio
Una organización adecuada del flujo de trabajo ayuda a maximizar la eficiencia del analizador, reducir el tiempo de inactividad y mejorar los tiempos de respuesta.
VirClia Lotus
VirClia Lotus es una plataforma automatizada de inmunoensayo por quimioluminiscencia diseñada para el diagnóstico de enfermedades infecciosas mediante tecnología monotest y flujo de trabajo de acceso aleatorio.
El sistema está diseñado para ofrecer flexibilidad en la rutina diaria, ayudando a los laboratorios a optimizar los tiempos de respuesta, el uso de reactivos y la organización del flujo de trabajo. Su diseño permite la carga continua de muestras y la gestión simultánea de múltiples parámetros, de acuerdo con las necesidades del laboratorio.
VirClia Lotus procesa y reporta el primer resultado en aproximadamente 1 hora y 3 minutos. A partir de ese momento, se reporta un nuevo resultado cada 35 segundos.
VirClia Lotus puede procesar 40 pruebas en 1 hora y 30 minutos, y 80 pruebas en 2 horas y 50 minutos.
VirClia Lotus puede alojar hasta 50 tubos de muestra simultáneamente en el carrusel de muestras. Una vez dispensadas las muestras, el instrumento informa al usuario y permite retirar los tubos para cargar nuevas muestras.
VirClia Lotus permite la carga continua tanto de muestras como de reactivos.
VirClia Lotus permite asignar hasta 39 parámetros diferentes para su análisis en una misma muestra.
Sí. Las muestras urgentes pueden cargarse en cualquier momento, incluso cuando VirClia Lotus ya está en funcionamiento. El instrumento permite introducir la muestra urgente y programar el test o los tests necesarios en el menor tiempo posible.
La muestra urgente y los tests solicitados se procesan de forma inmediata, sin esperar a que finalice la rutina previamente programada. Todos los tests solicitados para la muestra urgente se procesan simultáneamente y los resultados se reportan de manera consecutiva.
No. VirClia Lotus utiliza puntas metálicas para la dispensación de muestras y reactivos.
Las puntas se lavan interna y externamente con una solución descontaminante y una solución de lavado, ayudando a prevenir la contaminación cruzada entre muestras y reactivos.
VirClia Lotus puede alojar diferentes tipos de tubos de muestra, incluyendo tubos primarios, tubos de laboratorio y copas pediátricas.
VirClia Lotus también dispone de un adaptador para tubos cónicos de 2 mL, que asegura una correcta alineación para facilitar la aspiración de la muestra.
Las tiras procesadas se descartan automáticamente en un contenedor de residuos. Esto permite que VirClia Lotus esté preparado para procesar nuevas pruebas en modo de carga continua, sin intervención directa del usuario.
Sí. A través del software Middleware Vircom, VirClia Lotus almacena todos los resultados obtenidos en unidades relativas de luz (RLU) para controles negativos y calibradores.
Estos resultados pueden filtrarse por parámetro, fecha y lote de producto. Vircom también puede generar gráficos que muestran el valor medio y los rangos correspondientes a ±3 desviaciones estándar.
El análisis de acceso aleatorio permite a los laboratorios procesar muestras de forma independiente, sin necesidad de esperar a que finalice un lote analítico completo.
Este flujo de trabajo mejora la flexibilidad operativa al permitir introducir muestras urgentes en cualquier momento durante la rutina. También puede ayudar a reducir los tiempos de respuesta y mejorar la organización del flujo de trabajo en laboratorios con cargas de trabajo variables o impredecibles.
La carga continua permite introducir muestras, reactivos y consumibles en el analizador mientras el procesamiento rutinario está en curso.
Esta funcionalidad ayuda a los laboratorios a mantener un flujo de trabajo ininterrumpido y a optimizar la gestión diaria de muestras, sin necesidad de detener o reiniciar las series analíticas.
Sí. VirClia Lotus está diseñado para funcionar en modo de acceso aleatorio, lo que permite procesar muestras urgentes o STAT sin esperar a que finalicen los lotes de rutina.
Esta capacidad puede ayudar a los laboratorios a mejorar los tiempos de respuesta para solicitudes prioritarias y a optimizar la gestión del flujo de trabajo rutinario.
Sí. VirClia Lotus está diseñado para permitir la gestión simultánea de múltiples parámetros de enfermedades infecciosas dentro del mismo flujo de trabajo.
Esta flexibilidad ayuda a los laboratorios a optimizar la rutina diaria y a mejorar la eficiencia al procesar diferentes ensayos durante la misma sesión analítica.
El mantenimiento rutinario es esencial para garantizar un rendimiento óptimo del analizador y la fiabilidad del flujo de trabajo a largo plazo.
Los laboratorios deben seguir los procedimientos de mantenimiento preventivo especificados en el manual del sistema, incluyendo la limpieza rutinaria diaria, semanal y mensual, la monitorización de consumibles y la verificación periódica del rendimiento del analizador.
La aplicación constante de estas prácticas de mantenimiento ayuda a mantener una operación rutinaria estable.
VirClia Lotus está diseñado para permitir la integración con sistemas de información de laboratorio (LIS) de manera bidireccional a través del middleware Vircom, facilitando la trazabilidad de las muestras, la estandarización del flujo de trabajo y la gestión de resultados.
Las capacidades de conectividad pueden depender de la infraestructura local del laboratorio.
Inmunofluorescencia Indirecta - IFI
La inmunofluorescencia indirecta (IFI) es un método serológico utilizado para detectar anticuerpos específicos en muestras de pacientes. Durante el ensayo, los anticuerpos presentes en la muestra se unen a antígenos fijados sobre un portaobjetos. Posteriormente, se añade un conjugado marcado con fluorescencia, lo que permite visualizar la reacción mediante un microscopio de fluorescencia.
La IFI se utiliza habitualmente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas porque combina una alta sensibilidad con interpretación visual. Es especialmente útil en infecciones en las que los patrones de anticuerpos, los títulos o la evolución serológica aportan información diagnóstica relevante.
La IFI se considera un método de referencia para varias enfermedades infecciosas porque permite visualizar directamente la reactividad específica de los anticuerpos y aporta información más allá de un simple resultado positivo o negativo.
Esta técnica es especialmente valiosa cuando los títulos de anticuerpos, las muestras pareadas o las respuestas específicas frente a distintas fases son clínicamente relevantes. Esto ocurre en varias infecciones vectoriales, zoonóticas y atípicas, en las que la interpretación suele requerir la correlación con el contexto clínico y epidemiológico.
Los títulos de anticuerpos se determinan identificando la mayor dilución de suero en la que la fluorescencia específica sigue siendo detectable. En general, títulos más altos indican una respuesta de anticuerpos más intensa, aunque su significado clínico depende del patógeno, del momento de recogida de la muestra y del contexto clínico.
Un título aislado puede aportar información útil, pero la interpretación suele ser más sólida cuando se dispone de muestras pareadas. Un aumento significativo del título entre una muestra aguda y una muestra convaleciente puede apoyar una infección reciente o activa.
La seroconversión es el desarrollo de anticuerpos específicos detectables en un paciente que previamente era seronegativo. En serología infecciosa, puede observarse cuando una muestra inicial es negativa y una muestra posterior se vuelve positiva.
La seroconversión puede aportar una evidencia sólida de infección reciente, especialmente cuando se interpreta junto con hallazgos clínicos compatibles y una adecuada cronología de recogida de muestras.
La interpretación de muestras pareadas compara los títulos de anticuerpos de dos muestras recogidas en diferentes fases de la infección, habitualmente una muestra de fase aguda y una muestra de fase convaleciente.
Un aumento significativo del título de anticuerpos entre ambas muestras puede apoyar una infección reciente o activa. Este enfoque es especialmente útil cuando la serología inicial es negativa o no concluyente, ya que la producción de anticuerpos puede no ser detectable durante los primeros días de infección.
Los anticuerpos de fase I y fase II son especialmente relevantes en la serología de Coxiella burnetii. Estas respuestas de anticuerpos pueden aportar información útil sobre el estadio o la forma de la infección.
En general, los anticuerpos de fase II se asocian con mayor frecuencia a infección aguda, mientras que los anticuerpos de fase I pueden asociarse a infección crónica o persistente. La interpretación debe considerar siempre la historia clínica, los títulos de anticuerpos, los resultados de seguimiento y los criterios diagnósticos validados.
La fluorescencia inespecífica se produce cuando se observa fluorescencia que no está claramente relacionada con la reacción antígeno-anticuerpo esperada. Puede deberse a problemas de calidad de la muestra, anticuerpos con reactividad cruzada, lavado inadecuado, tinción de fondo excesiva o artefactos por secado del portaobjetos.
Dado que la fluorescencia inespecífica puede dificultar la interpretación, los resultados de IFI deben ser leídos por personal formado, utilizando controles adecuados y criterios de lectura estandarizados.
La autofluorescencia es la fluorescencia natural emitida por ciertos materiales biológicos o componentes del portaobjetos, independientemente de la reacción específica del ensayo. Puede generar señal de fondo o patrones que interfieran con la interpretación.
Una configuración adecuada del microscopio, el uso de controles apropiados y una lectura realizada por personal experimentado ayudan a diferenciar la autofluorescencia de la fluorescencia específica verdadera.
La fluorescencia débil puede producirse cuando la concentración de anticuerpos es baja, los reactivos no se han manipulado correctamente, las condiciones de incubación no son óptimas o la configuración del microscopio no es adecuada. También puede deberse a un lavado excesivo o a una exposición prolongada de los reactivos fluorescentes a la luz.
Cuando se observa fluorescencia débil, los laboratorios deben revisar las condiciones de almacenamiento de los reactivos, las condiciones de incubación, la preparación del conjugado, los pasos de lavado y el rendimiento del microscopio antes de interpretar el resultado.
Los portaobjetos y reactivos de IFI deben conservarse de acuerdo con las condiciones especificadas en las instrucciones de uso para preservar la estabilidad del antígeno y el rendimiento de la fluorescencia.
Los portaobjetos deben protegerse de la humedad y de las fluctuaciones de temperatura, mientras que los conjugados fluorescentes deben protegerse de la exposición prolongada a la luz. Una conservación incorrecta puede reducir la intensidad de la señal, aumentar la fluorescencia de fondo o afectar a la fiabilidad del ensayo.
El mantenimiento del microscopio de fluorescencia es esencial para una interpretación fiable de la IFI. Los componentes ópticos deben mantenerse limpios, el rendimiento de la iluminación debe monitorizarse y los filtros deben revisarse de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
Un mantenimiento regular ayuda a garantizar una visualización consistente de la fluorescencia, reduce la variabilidad en la interpretación y contribuye al rendimiento del ensayo a largo plazo.
Si el procedimiento de lavado se realiza correctamente, el desprendimiento del antígeno no debería producirse de forma habitual. Si no se observan células ni fluorescencia, debe revisarse el procedimiento de lavado para confirmar que ningún paso haya podido dañar o desprender el antígeno del portaobjetos.
Deben comprobarse los siguientes puntos:
- La solución de lavado debe prepararse y conservarse de acuerdo con las instrucciones de uso.
- Solo debe utilizarse la solución de lavado incluida en el kit Vircell. No deben utilizarse soluciones de lavado de otros fabricantes.
- Deben respetarse estrictamente los tiempos de lavado indicados en las instrucciones de uso.
- Debe evitarse la aplicación directa de un chorro de PBS o agua sobre el pocillo.
- También debe evitarse la superposición de portaobjetos durante el lavado.
El aspecto de los portaobjetos de Rickettsia y Bartonella puede diferir del de otros productos comerciales de IFI debido a diferencias en la preparación del antígeno.
Como parte de su proceso de producción, Vircell elimina restos de células Vero de las preparaciones de Rickettsia y Bartonella. Este proceso está orientado a mejorar la especificidad del ensayo, reduciendo la fluorescencia inespecífica que podría producirse cuando el suero del paciente reacciona con material celular Vero residual.
Al minimizar estos restos celulares, los portaobjetos están diseñados para reducir el riesgo de patrones de fluorescencia que puedan interpretarse erróneamente como reacciones positivas. Este enfoque en la preparación del antígeno favorece una interpretación más clara y contribuye a la especificidad del ensayo.
Si se observa fluorescencia de fondo, debe revisarse el procedimiento para confirmar que las instrucciones de uso se han seguido correctamente.
Deben comprobarse los siguientes puntos:
- La solución de lavado debe prepararse y conservarse de acuerdo con las instrucciones de uso.
- El protocolo de lavado debe revisarse cuidadosamente. Deben respetarse los tiempos de lavado especificados y aplicarse una agitación suave para asegurar un lavado uniforme de todos los pocillos.
- Los portaobjetos deben aclararse con agua destilada después de cada lavado, ya que las sales residuales de la solución de lavado pueden contribuir a la fluorescencia de fondo.
- Deben verificarse los tiempos de incubación, ya que una incubación más prolongada de lo recomendado puede aumentar la fluorescencia de fondo.
- Los pocillos no deben secarse durante la incubación. Esto es especialmente importante si la fluorescencia de fondo afecta solo a algunos pocillos. Se recomienda utilizar una cámara húmeda durante la incubación para evitar el secado completo de los pocillos.
Este patrón puede estar relacionado con el secado del conjugado o de la antiglobulina humana durante el ensayo. Para ayudar a prevenirlo, las incubaciones de la muestra y del conjugado deben realizarse en una cámara húmeda, según lo indicado en las instrucciones de uso.
También debe revisarse el paso de lavado para confirmar que se ha realizado correctamente y de forma uniforme en todos los pocillos.
En casos poco frecuentes, este tipo de resultado también puede asociarse a un efecto prozona. No obstante, se trata de una situación infrecuente y generalmente se observa solo en sueros con títulos de anticuerpos muy elevados.
Cuando se observa un número elevado de resultados positivos a la dilución recomendada para cribado, debe considerarse la prevalencia de la enfermedad en la población analizada o en el área geográfica correspondiente.
Por ejemplo, los resultados detectados a títulos bajos, como 1:64, pueden reflejar en algunos casos exposición previa o infección pasada, más que infección reciente o activa. En estas situaciones, puede ser necesario realizar una titulación de anticuerpos para apoyar una interpretación más precisa.
Los resultados deben interpretarse siempre junto con los hallazgos clínicos, el contexto epidemiológico y, cuando sea necesario, la serología de seguimiento.
Cuando se utiliza la técnica de microinmunofluorescencia (MIF), la respuesta de anticuerpos frente a especies de Chlamydia debe evaluarse simultáneamente frente a las diferentes especies incluidas en el ensayo.
Este enfoque ayuda a valorar la posible reactividad cruzada y permite apoyar la interpretación en función de la respuesta diferencial observada frente a cada especie. Por este motivo, el portaobjetos incluye pocillos para Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae y Chlamydophila psittaci.
El kit puede utilizarse para evaluar la respuesta de anticuerpos frente a cualquiera de las especies incluidas, de acuerdo con las instrucciones de uso. El control positivo es reactivo para las tres especies.